Streptavidin-SH|鏈霉親和素-巰基

鏈霉親和素-巰基（Streptavidin-Thiol）是一種經(jīng)過化學(xué)修飾的鏈霉親和素，它在生物研究和診斷中具有廣泛的應(yīng)用。以下是對鏈霉親和素-巰基的詳細(xì)解釋：

一、鏈霉親和素簡介

鏈霉親和素（Streptavidin，SA）是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，具有與生物素（Biotin）高親和力的特性。這種高親和力的結(jié)合使得鏈霉親和素在生物分子的檢測、分離和純化等領(lǐng)域中得到了廣泛應(yīng)用。

二、巰基修飾

巰基（–SH）是一種非?；钴S的官能團(tuán)，通過化學(xué)修飾將巰基引入鏈霉親和素分子上，可以使其與其他含有巰基或巰基反應(yīng)性基團(tuán)的分子發(fā)生特異性共價(jià)反應(yīng)。這種修飾方法通常用于與目標(biāo)分子的共價(jià)結(jié)合，從而擴(kuò)展鏈霉親和素的應(yīng)用范圍。

三、鏈霉親和素-巰基的制備

鏈霉親和素-巰基的制備通常包括以下幾個(gè)步驟：

材料準(zhǔn)備：需要鏈霉親和素和巰基修飾試劑，如N-琥珀酰亞胺-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯（SPDP）等。

溶解與混合：在PBS緩沖液中溶解鏈霉親和素，并配制適當(dāng)濃度。同時(shí)，將SPDP溶解在適量的DMSO中，制備高濃度的修飾試劑溶液。然后，將SPDP溶液緩慢加入鏈霉親和素溶液中，維持反應(yīng)體系的pH值在7.5左右。

反應(yīng)與純化：在室溫下反應(yīng)1-2小時(shí)，使SPDP的NHS部分與鏈霉親和素上的氨基反應(yīng)，形成二硫鍵。接著，向反應(yīng)混合物中加入還原劑如DL-二硫蘇糖醇（DTT）或三(2-羧乙基)膦（TCEP），斷開二硫鍵，釋放出巰基。反應(yīng)完成后，通過透析或凝膠過濾去除未反應(yīng)的修飾試劑和還原劑，得到純化的鏈霉親和素-巰基。

四、鏈霉親和素-巰基的應(yīng)用

表面修飾：鏈霉親和素-巰基可以用于修飾金納米顆粒、電極、微孔板等表面，通過巰基與金等表面形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵，從而擴(kuò)展這些材料在生物檢測和傳感中的應(yīng)用。

共價(jià)連接：鏈霉親和素-巰基可以與其他含有馬來酰亞胺或其他巰基反應(yīng)性基團(tuán)的分子進(jìn)行共價(jià)連接，用于構(gòu)建復(fù)雜的生物傳感器和診斷試劑。

生物素檢測：鏈霉親和素-巰基可以結(jié)合生物素標(biāo)記的分子，如抗體、核酸、蛋白質(zhì)等，廣泛應(yīng)用于免疫分析、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞成像等領(lǐng)域。

五、鏈霉親和素-巰基的優(yōu)勢

鏈霉親和素-巰基的優(yōu)勢在于其高特異性、高親和力以及修飾后不影響鏈霉親和素的生物素結(jié)合能力。這些特性使得鏈霉親和素-巰基在生物化學(xué)、免疫學(xué)和納米技術(shù)等領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用前景。

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