孕酮-過(guò)氧化物酶標(biāo)記物|Testosterone-Peroxidase Conjugate(Testosterone-HRP)

孕酮 - 過(guò)氧化物酶標(biāo)記物的檢測(cè)方法主要有以下幾種：

1.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）：

原理：利用抗原與抗體的特異性結(jié)合以及酶的催化作用。將已知量的孕酮抗體包被在酶標(biāo)板上，加入待檢測(cè)的含有孕酮 - 過(guò)氧化物酶標(biāo)記物的樣本，樣本中的孕酮 - 過(guò)氧化物酶標(biāo)記物會(huì)與酶標(biāo)板上的抗體結(jié)合。然后加入過(guò)氧化物酶的底物，過(guò)氧化物酶會(huì)催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)，如顏色變化等。通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)產(chǎn)物的吸光度值，可以確定樣本中孕酮 - 過(guò)氧化物酶標(biāo)記物的含量。

操作步驟： 

預(yù)處理：對(duì)酶標(biāo)板進(jìn)行處理，如用無(wú)水乙醇浸泡、蒸餾水沖洗、烘干等，以去除酶標(biāo)板上的有機(jī)成分，保證后續(xù)反應(yīng)的準(zhǔn)確性。

包被抗體：將孕酮抗體稀釋到合適的濃度，加入到酶標(biāo)板的孔中，在一定條件下（如 4℃冰箱過(guò)夜）讓抗體與酶標(biāo)板結(jié)合。

洗滌：去除未結(jié)合的游離抗體，通常使用洗滌緩沖液進(jìn)行多次洗滌。

加樣：加入待檢樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，以及孕酮 - 過(guò)氧化物酶標(biāo)記物。

溫育：將酶標(biāo)板在適宜的溫度下（如 37℃）孵育一段時(shí)間，使抗原與抗體充分結(jié)合。

洗滌：再次洗滌，去除未結(jié)合的物質(zhì)。

顯色：加入底物溶液，在一定條件下（如室溫或 37℃）反應(yīng)一段時(shí)間，讓過(guò)氧化物酶催化底物產(chǎn)生顏色變化。

終止反應(yīng)：加入終止液，終止顯色反應(yīng)。

檢測(cè)：使用酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)（如 450nm）下檢測(cè)各孔的吸光度值。

2.免疫層析法：

原理：基于免疫反應(yīng)和層析技術(shù)。在試紙條上預(yù)先包被孕酮抗體和其他相關(guān)試劑，當(dāng)樣本滴加到試紙條上后，樣本中的孕酮 - 過(guò)氧化物酶標(biāo)記物會(huì)與抗體結(jié)合，然后在層析作用下沿著試紙條移動(dòng)。在試紙條上會(huì)形成檢測(cè)線(xiàn)和控制線(xiàn)，如果樣本中含有孕酮 - 過(guò)氧化物酶標(biāo)記物，檢測(cè)線(xiàn)會(huì)出現(xiàn)顏色變化，從而實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)。

操作步驟：將待檢樣本滴加到試紙條的樣本孔中，等待一段時(shí)間后，觀察試紙條上的檢測(cè)線(xiàn)和控制線(xiàn)的顏色變化。如果檢測(cè)線(xiàn)和控制線(xiàn)都出現(xiàn)顏色，說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；如果只有控制線(xiàn)出現(xiàn)顏色，說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果為陰性；如果控制線(xiàn)都不出現(xiàn)顏色，說(shuō)明試紙條無(wú)效，需要重新檢測(cè)。

3.化學(xué)發(fā)光免疫分析法：

原理：利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光特性進(jìn)行檢測(cè)。將孕酮 - 過(guò)氧化物酶標(biāo)記物與樣本中的孕酮競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體，然后加入化學(xué)發(fā)光底物，過(guò)氧化物酶會(huì)催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號(hào)。通過(guò)檢測(cè)化學(xué)發(fā)光的強(qiáng)度，可以確定樣本中孕酮 - 過(guò)氧化物酶標(biāo)記物的含量。

操作步驟：與 ELISA 法類(lèi)似，包括包被抗體、加樣、溫育、洗滌等步驟，只是在最后檢測(cè)時(shí)使用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀檢測(cè)化學(xué)發(fā)光的強(qiáng)度，而不是檢測(cè)吸光度值。

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